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免疫组化操作步骤
(酶联免疫吸附试验：γ-ECS试剂盒ELISA
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
↓ 加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔 中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）
↓ 于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标**抗体（抗抗体）0.1ml， 37℃孵育30-60分钟，洗涤,*后一遍用DDW洗涤。
↓ 其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
试剂器材 γ-ECS试剂盒ELISA
1. 试剂 （1） 包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）: NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸馏水至1000ml
（2） 洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸馏水至1000ml
（3） 稀释液： 牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使
（4） 终止液（2M H2SO4）： 蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98％）21.7ml。
（5） 底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml 0.1M柠檬酸（19.2克／L） 24.3ml 加蒸馏水50ml。
（6） TMB（四甲基联苯胺）使用液: TMB（10mg／5ml无水乙醇）0.5ml 底物缓冲液（PH5.5） 10ml 0.75％H2O2 32μl
（7） ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物缓冲液（PH5.5） 1ml 3％H2O2 2μl
（8） 抗原、抗体和酶标记抗体。
（9） 正常人血清和阳性对照血清。
2. 器材:
（1） 聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。
（2） 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
（3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。γ-ECS试剂盒ELISA
影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点、Elisa试剂盒测定技术的发展 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，
而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并*终肯定会让我们对整个生命科学有一个**而彻底的认识，
其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。
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